ABSTRACT
RESUMEN Objetivos: Evaluar la actividad fotodinámica in vitro de la ftalocianina de aluminio tetrasulfonada clorada (AlPcClS4) sobre promastigotes y amastigotes de Leishmania (Viannia) peruviana y Leishmania (Viannia) braziliensis. Materiales y métodos: La actividad del tratamiento fotodinámico empleando AlPcClS4 sobre promastigotes y amastigotes de Leishmania fue determinada mediante el método colorimétrico Metil Tiazol Tetrazolium (MTT) y PCR cuantitativo, respectivamente. Resultados: El tratamiento fotodinámico presentó un efecto inhibitorio sobre promastigotes, principalmente sobre Leishmania (V.) peruviana, en menor proporción sobre Leishmania (V.) braziliensis y sobre las formas intracelulares de ambas especies. En Leishmania (V.) peruviana, a las 24 horas posirradiación a 200 µM y 350 µM el efecto inhibitorio fue del 72,9% y 73,9%, respectivamente y a las 96 horas fue del 78,8% y 80,6%, respectivamente. En las formas intracelulares, empleando 200 µM y evaluado a las 72 horas postratamiento, se observó una inhibición del 57,8% de amastigotes de Leishmania (V.) peruviana. El IC50 fue del 56,5; 50; 44; y 39,7 µM, que corresponde a las 24, 48, 72 y 96 horas posirradiación, respectivamente. Conclusiones: El tratamiento fotodinámico empleando AlPcClS4 frente a las especies de Leishmania presentó resultados alentadores principalmente sobre Leishmania (V.) peruviana, lo cual sugiere su potencial uso como alternativa o complemento del tratamiento convencional de la leishmaniasis tegumentaria. Sin embargo, aún se requiere continuar con nuevos ensayos para determinar el índice de selectividad sobre el parásito en su forma intracelular, y desarrollar estrategias que faciliten el ingreso eficiente de la molécula hacia la célula hospedera y al parásito.
ABSTRACT Objectives: To evaluate the in vitro photodynamic activity of aluminum phthalocyanine tetrasulfonate chloride (AlPcClS4) on promastigotes and amastigotes of Leishmania (Viannia) peruviana and Leishmania (Viannia) braziliensis. Materials and methods: The activity of photodynamic therapy using AlPcClS4 on Leishmania promastigote and amastigotes was determined by the Methyl Thiazole Tetrazolium (MTT) colorimetric method and quantitative PCR, respectively. Results: Photodynamic treatment showed an inhibitory effect on promastigotes, particularly on Leishmania (V.) peruviana, to a lesser extent on Leishmania (V.) braziliensis and also on intracellular forms of both species. At 24 hours post-radiation, using concentrations of 200 μM and 350 μM, the inhibitory effect on Leishmania (V.) peruviana was 72.9% and 73.9% respectively; at 96 hours the inhibitory effect was of 78.8% and 80.6%, respectively. Regarding intracellular forms, the inhibitory effect on Leishmania (V.) peruviana amastigotes was 57.8% at 72 hours post-treatment, using a concentration of 200 μM. The IC50 was 56.5, 50, 44 and 39.7 μM, at 24, 48, 72 and 96 hours post-radiation, respectively. Conclusions: Photodynamic therapy using AlPcClS4 against Leishmania species showed encouraging results, mainly on Leishmania (V.) peruviana, suggesting a potential use as an alternative or complement to the usual treatment of tegumentary leishmaniasis. However, new trials are still required to determine the selectivity index for the intracellular form of the parasite, and to develop methods to facilitate the efficient entry of the molecule into the host cell and the parasite.
Subject(s)
Leishmania braziliensis , In Vitro Techniques , Leishmaniasis , Aluminum , Photochemotherapy , Tropical Medicine , Leishmaniasis, Cutaneous , Photosensitizing AgentsABSTRACT
RESUMEN Objetivos. Aislar, seleccionar e identificar actinomicetos asociados a hormigas cortadoras de hojas Atta cephalotes (Linnaeus, 1758), que presenten mayor actividad anti-Candida. Materiales y métodos. Estudio transversal realizado en hormigas recolectadas de una localidad de Huánuco, Perú, a partir de las cuales se aislaron cepas de actinomicetos que fueron evaluadas mediante pruebas in vitro para determinar su capacidad antagonista frente a especies de Candida. Los actinomicetos de mayor antagonismo fueron seleccionados y cultivados en agitación, luego se obtuvieron los metabolitos extracelulares con solventes orgánicos y finalmente se evaluaron los extractos crudos para determinar cuantitativamente la concentración mínima inhibitoria (CMI). Resultados. Se logró aislar 30 actinomicetos, de los cuales el 47 % presentaron actividad antagonista a Candida albicans (C. albicans) ATCC 7516, el 43 % a Candida parapsilosis ATCC 7307, el 37% a Candida tropicalis ATCC 7206 y C. albicans ATCC 10231 y el 30% a C. albicans ATCC 98028. Extractos orgánicos de las cepas HAA-16 y HAA-17 presentaron marcada actividad anti-Candida; siendo el extracto de acetato de etilo de la cepa HAA17 el de mejor rendimiento por tener mayor espectro de actividad y presentar una CMI de 3,25 mg/ml frente a C. albicans ATCC 7516 y Candida parapsilosis ATCC 7307. Los actinomicetos seleccionados se identificaron mediante técnicas moleculares como miembros del género Streptomyces. Conclusiones. Los actinomicetos asociados a Atta cephalotes son excelentes productores de compuestos bioactivos, capaces de inhibir el crecimiento de levaduras patógenas del género Candida y con potencial aplicación en el desarrollo de nuevos productos naturales de interés biomédico.
ABSTRACT Objectives. To isolate, select and identify actinomyces associated to leaf-cutting ants Atta cephalotes (Linnaeus, 1758), that present a greater anti-Candida activity. Materials and Methods. Cross-sectional study made with ants collected at a location in Huánuco, Peru, from which strands of actinomyces were isolated and later evaluated by in vitro testing in order to determine its antagonistic capacity against species of Candida. The actinomyces with greater antagonism were selected and cultured by agitation, then the reliable extracellular metabolites were obtained with organic solvents, and finally the crude extracts were evaluated to determine quantitatively the minimum inhibiting concentration (MIC). Results. Thirty (30) actinomyces were isolated, of which 47% exhibited antagonistic activity against Candida albicans (C. albicans) ATCC 7516, 43% to Candida parapsilosis ATCC 7307, 37% to Candida tropicalis ATCC 7206 and C. albicans ATCC 10231, and 30% to C. albicans ATCC 98028. Organic extracts of the HAA-16 and HAA-17 strands exhibited noticeable anti-Candida activity, being the ethyl acetate extract of the HAA-17 strand the one with the highest performance thanks to a wider activity spectrum of MIC 3.25 mg/mL against C. albicans ATCC 7516 and Candida parapsilosis ATCC 7307. The selected actinomyces were identified by means of molecular techniques as members of the Streptomyces genus. Conclusions. Actinomyces associated to Atta cephalotes are excellent producers of bioactive compounds, being able to inhibit the growth of pathogenic mold of the Candida genus and with potential for application in the development of new natural products for the biomedical field.
Subject(s)
Animals , Ants/microbiology , Actinomyces/metabolism , Candida/drug effects , Antifungal Agents/pharmacology , Peru , Actinomyces/isolation & purification , Microbial Sensitivity Tests , Cross-Sectional Studies , Antifungal Agents/isolation & purificationABSTRACT
Los metabolitos de un actinomiceto de origen marino, identificado como Streptomyces erythrogriseus cepa M10-77, fueron evaluados por su capacidad antimicrobiana y sinérgica con antibióticos convencionales. Las pruebas de antagonismo se realizaron frente a patógenos multidrogorresistentes (MDR) de origen clínico, siendo muy efectivos principalmente frente a especies patógenas de Staphylococcus y Enterococcus. Se determinó la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de extractos diclorometánicos frente a los patógenos S. aureus 1094, S. epidermidis 1093 y Staphylococcus coagulasa negativo 348, siendo estos valores de 3,9; 15,7 y 1,9 µg/mL respectivamente. Los componentes del extracto diclorometánico fueron fraccionados parcialmente, obteniéndose hasta 4 fracciones orgánicas (I, II, III, IV), las que mostraron actividades inhibitorias de la cepa referencial S. aureus ATCC 43300. Los bioensayos frente a S. aureus meticilino resistente (MRSA) mostraron actividad sinérgica de la fracción II del extracto con antibióticos betalactámicos y aminoglucósidos, resaltando la repotenciación de la actividad de la bencilpenicilina en 128 veces el valor basal; así como de la gentamicina en 8 veces sobre el valor basal. S. erythrogriseus cepa M10-77 resultó ser un productor de metabolitos antibacterianos de alta potencia y con actividad sinérgica con antibióticos de referencia médica.
Metabolites of a marine actinomycete, identified as Streptomyces erythrogriseus M10-77 strain were evaluated for antimicrobial and synergistic activity with conventional antibiotics. Antagonism tests were conducted against multidrug resistant (MDR) pathogens of clinical origin, being very effective mainly against pathogenic Staphylococcus and Enterococcus. Minimum Inhibitory Concentrations (MIC) of dichloromethane extracts were determined against pathogenic S. aureus 1094, S. epidermidis and coagulase-negative Staphylococcus 1093 348, these values being 3.9; 15.7 and 1.9 μg/mL respectively. The components of dichloromethane extracts were fractionated partially yielding four organic fractions (I, II, III, IV), which showed inhibitory activity against the reference strain S. aureus ATCC 43300. The bioassays against S.aureus methicillin-resistant (MRSA ) produced synergistic activity of the extract fraction II with beta-lactams and aminoglycoside antibiotics, highlighting the upgrading of the activity of penicillin at 128 times above the baseline and gentamicin 8-fold above baseline. S. erythrogriseus M10-77 strain proved to be a producer of antibacterial metabolites with high power and synergistic activity with antibiotics of medical use.